蛋白濃縮超濾管是一種常用于蛋白質(zhì)濃縮的實(shí)驗(yàn)工具，主要用于實(shí)驗(yàn)室中的生物學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等學(xué)科的研究操作中。

該工具的主要作用是通過(guò)超濾技術(shù)對(duì)生物液體中的大分子蛋白全體進(jìn)行分離和濃縮，使其濃縮至原來(lái)的數(shù)倍甚至更高濃度，從而更好地進(jìn)行后續(xù)活性鑒定、研究和分析。

蛋白濃縮超濾管使用之前需要準(zhǔn)備的物品

使用蛋白濃縮超濾管進(jìn)行蛋白質(zhì)濃縮之前，需要準(zhǔn)備以下物品：

• 待處理的生物樣本或液體（幾乎任何樣品都可以使用）
• 耐高溫的無(wú)菌離心管或管架
• 冰箱或低溫冷凍柜（用于保持樣品低溫）
• 離心機(jī)（用于去除樣品中大分子的混雜物）
• 含有藥劑的PBS（磷酸鹽緩沖液）或其他溶液用于洗滌或調(diào)節(jié)pH值

蛋白濃縮超濾管的使用步驟

1. 選擇合適的超濾管進(jìn)行試驗(yàn)

根據(jù)待處理樣品的特性（如分子量、濃度等）選擇合適的超濾管，例如 Amicon Ultra 系列的管子。此外，液相比較清澈的試樣可以選擇 Savant SUPEX 濾膜。

2. 設(shè)定超濾管的旋轉(zhuǎn)速度

設(shè)定合適的轉(zhuǎn)速，以確保樣品可以均勻地通過(guò)超濾膜，同時(shí)在盡量短的時(shí)間內(nèi)完成濃縮。比如，Amicon Ultra 系列通常取 3000RPM 至 5000RPM。

3. 加樣并進(jìn)行離心

將待濃縮的生物樣品放入耐高溫的無(wú)菌離心管或管架中，以防止樣品震動(dòng)時(shí)超濾管碰撞陶瓷濾盤(pán)。對(duì)于含有大量雜質(zhì)的樣品，需要通過(guò)小鼠或大鼠IgG球蛋白獎(jiǎng)金和另一種抗體，去除雜質(zhì)。

離心過(guò)程需要逐漸遞增的加速度，一般為 500g 到 1500g（持續(xù) 10 分鐘）。離心結(jié)束后，需要倒掉離心管底端的液體。

4. 添加離心緩沖液

用 10mM PBS，50mM NaCl 這樣含鹽量的緩沖液進(jìn)行樣品重懸液。如果含有較多的沉淀物或殘余纖維，在樣品超濾過(guò)濾之前可以先施加 2000RPM 離心去除。

5. 濃縮

將超濾管裝入管架中，注滿(mǎn)添加了離心緩沖液的樣品。進(jìn)行一段持續(xù)的離心，并定時(shí)檢查管內(nèi)液位對(duì)比。持續(xù)進(jìn)行離心處理過(guò)程，知道最大閥值被達(dá)到，其主要根據(jù)我們上文中已經(jīng)設(shè)定的那個(gè)\"超濾管的旋轉(zhuǎn)速度\"，可以應(yīng)用專(zhuān)業(yè)工具完成這一操作。

6. 分離蛋白濃縮物

在最大超濾管閥值達(dá)到后，蛋白濃縮物就可以被分離出來(lái)了。倒轉(zhuǎn)超濾管，用清洗溶液沖洗蛋白質(zhì)緩沖液含有數(shù)次。第一次清洗時(shí)間較長(zhǎng)，以后清洗時(shí)間可以縮短 50% 左右。在設(shè)定旋轉(zhuǎn)速度較低的最后一次離心中，將管底的殘余液體處理掉。

蛋白濃縮超濾管的注意事項(xiàng)

使用蛋白濃縮超濾管時(shí)需要注意的事項(xiàng)有：

• 注意離心轉(zhuǎn)速的設(shè)定和穩(wěn)定性，以免損壞樣品或超濾膜。
• 選擇合適的超濾管，避免樣品分子量太大或太小。
• 進(jìn)行超濾過(guò)程中需要注意樣品的濃度和 pH 值。
• 管子不耐高溫，需要注意在進(jìn)行超濾處理時(shí)不要過(guò)度震蕩。
• 離心緩沖液的選擇也非常重要，盡量使用含有足夠鹽濃度的緩沖液，一定程度上保護(hù)樣品。

使用蛋白濃縮超濾管的優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)

使用蛋白濃縮超濾管進(jìn)行蛋白質(zhì)濃縮過(guò)程具有以下優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)：

• 高效：可以將大分子生物材料濃縮至更高的濃度。
• 純度更高：去除多余的緩沖液、鹽和其他雜質(zhì)，提高樣品的純度。
• 方便：操作簡(jiǎn)單，可用于各種類(lèi)型的樣品。
• 經(jīng)濟(jì)：無(wú)需采用復(fù)雜的重懸液來(lái)造成超濾過(guò)程，降低濃縮時(shí)間、管子數(shù)量、暴露材料資源和實(shí)驗(yàn)成本。